Flp/FRT系统是一种基因编辑技术,用于在哺乳动物细胞中进行同源重组。这种技术依赖于两个关键步骤:双链断裂(DSB)和修复。
1. 双链断裂:在DNA复制过程中,如果发生错误,会导致双链断裂。这些断裂通常发生在模板链和互补链之间。为了修复这些断裂,细胞需要找到合适的修复因子来连接断裂的DNA片段。
2. 修复机制:Flp/FRT系统中的修复机制涉及两种酶:FLP(Flippase)和FRT(Fusion Recombination Tool)。FLP酶可以识别并结合到断裂的DNA片段上,然后将其切除。接着,FRT酶可以识别并结合到另一个断裂的DNA片段上,将它们融合在一起。这个过程被称为“融合重排”。
3. 同源重组:通过融合重排,FRT酶可以将断裂的DNA片段重新连接起来,形成一个正确的DNA序列。这个过程称为同源重组。同源重组是基因编辑的关键步骤,因为它允许精确地修改目标基因。
4. 基因编辑:在Flp/FRT系统中,可以通过设计特定的FLP和FRT表达载体来实现对特定基因的编辑。例如,可以通过设计一个含有FLP和FRT表达载体的质粒,并将其转入目标细胞。当FLP和FRT表达载体被表达时,它们会启动同源重组过程,从而改变目标基因的序列。
总之,Flp/FRT系统是一种高效的基因编辑技术,通过双链断裂和修复机制实现对特定基因的精确编辑。这种技术在生物医学研究中具有广泛的应用前景,包括基因治疗、基因功能研究等。