NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）和EDC（1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐）是一类常用的化学试剂，用于羧基与氨基之间的活化反应。在实验中，这两种化合物通过特定的pH调节和缓冲液使用，能够有效激活羧基，从而促进后续的化学反应。
首先，NHS和EDC的活化机制是通过生成活化中间体来实现的。当NHS与EDC反应时，会生成一个稳定的活化中间体。这个中间体在后续的反应中起到关键作用，它不仅增强了羧基与氨基之间的反应速率，还提高了产率。这种活化过程通常在pH 4.5-7.2的水溶液中进行，而Sulfo-NHS则在这个pH范围内具有最佳的活性。
其次，MES缓冲液的使用对于活化羧基至关重要。MES缓冲液的pH值约为5，这是EDC/NHS活性最好的条件。在使用MES缓冲液时，需要特别注意的是，活化后的羧基不能与水直接接触，否则可能会影响反应效率或导致不必要的副反应。因此，在进行活化步骤之前，通常需要将MES或其他不含氨基、不含羧基的溶液加入到反应体系中，以确保羧基的完全活化。
此外，活化后的羧基与氨基的反应需要在适当的pH条件下进行。一般来说，EDC/NHS活化羧基的最佳pH范围是7-8，而在pH 7.2-7.5的条件下完成最后的偶联反应最为理想。因此，在实际操作中，需要根据具体的实验条件和目标产物的性质来选择合适的pH值，以保证反应的顺利进行。
综上所述，NHS和EDC通过与MES缓冲液中的羧基反应，实现了有效的活化。在实验操作中，需要严格控制pH值、避免水的影响、以及选择适当的缓冲液，才能达到预期的活化效果，进而提高羧基与氨基之间的反应效率，促进后续的化学反应。
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